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            色譜柱常見操作維護
            更新時間:2014-11-11   點擊次數:3167次

            色譜柱常見操作維護
            一、正確使用緩沖鹽  
            緩沖鹽通常易溶于水,難溶于有機溶劑,因此緩沖鹽使用不當會使其析出,堵塞填料基質上的微孔和顆粒間的空隙,使填料板結,柱壓上升;同時阻礙了基質上鍵合的碳鏈自由舒展,使色譜柱的保留能力下降,柱效降低。緩沖鹽析出后,去除非常困難,因此,正確的使用緩沖鹽對延長色譜柱使用壽命非常重要。
            正確使用緩沖鹽的目的是防止緩沖鹽析出,因此正確使用緩沖鹽的方法可歸結為一句話:使用前要過濾,使用后要沖洗。具體方法如下:
            1、等度條件:使用緩沖鹽前和使用后需用過渡流動相以1.0ml/min流速沖洗60min;使用后去除緩沖鹽的另一個方法是用過渡流動相以0.2ml/min流速沖洗色譜柱。
            2、梯度條件:用含有緩沖鹽的流動相跑梯度之前,用與初始流動相組成相同的過渡流動相以1.0ml/min流速沖洗60min,再用該過渡流動相以1.0ml/min沖洗色譜柱120min。含緩沖鹽流動相的梯度設定應盡量平緩,以避免梯度過程中緩沖鹽析出。
            注意:過渡流動相是指有機相和水相的組成與分析流動相相同,區別只是過渡流動相不含緩沖鹽。
            3、緩沖鹽析出的補救方法:
            1)方案1:用甲醇/20/80以1.0ml/min流速35攝氏度條件下反向沖洗色譜柱120min
            2)方案2:用甲醇/水=20/80以0.2ml/min流速反向沖洗色譜柱。

            二、防止強保留物質在色譜柱上存留
            強保留物質和大分子化合物在色譜柱中累積,對樣品中的化合物產生額外的保留行為,不僅引起峰型變寬、拖尾,使柱效下降,同時也會引起保留時間的變化,累積到一定程度時還會導致柱壓升高。由于強保留物質和大分子化合物對色譜分離的影響是一個累積效應,需要一定的時間才會體現出來,但對許多藥品特別是復雜樣品而言,很難判斷其是否是含有強保留物質,因此要防止強保留物質的累積,需要在每天的日常維護中用純甲醇或乙氰清洗色譜柱。 clin-lab.com
            清洗方法:
            1、未使用緩沖鹽:每天分析完成后,先用上述方法除去緩沖鹽,然后再用甲醇或乙氰反向沖洗色譜柱60min。
            2、使用過緩沖鹽:分析完成后,先用上述方法除去緩沖鹽,然后在用純甲醇或乙氰反向沖洗色譜柱60min
            3、補救方法:
            水——乙氰——氯仿(或異丙醇)——乙氰——水
            每一步以1.0ml/min流速反向沖洗色譜柱60min。
             

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